الکتروفورز
فناوری Simple Western™ تحلیل وسترن کاپیلاری خودکار را با استفاده از الکتروفورز موئینه برای جداسازی پروتئین‌ها و سپس شناسایی مبتنی بر ایمونواسی در یک سیستم کاملاً بسته فراهم می‌کند. این فناوری با ادغام فرآیند وسترن بلات سنتی در یک سیستم کاپیلاری کاملاً خودکار، آن را ساده‌سازی و خودکار می‌کند و به دلیل شرایط عملکردی کنترل‌شده و استاندارد، داده‌های کمی دقیق‌تری نسبت به وسترن بلات سنتی ارائه می‌دهد.
محصولات ما
مجموعه کاملی از الکتروفورز برای هر نیاز آزمایشگاهی
محصولات برند bio-techne
Abby
Jess
Leo
*Peggy Sue
NanoPro 1000
*Sally Sue
استفاده از الکتروفورز ها
پس از آماده‌سازی نمونه، نمونه‌ها در بافر بارگذاری باید روی ژل قرار داده شوند. پروتئین‌های موجود در نمونه با استفاده از الکتروفورز ژل SDS-PAGE بر اساس اندازه از یکدیگر جدا می‌شوند. الکتروفورز با قرار دادن قطب منفی (کاتد) در یک طرف ژل و قطب مثبت (آند) در طرف مقابل انجام می‌شود. SDS که به پروتئین‌ها متصل است و دارای بار منفی است، باعث حرکت کمپلکس‌های پروتئینی به سمت قطب مثبت (آند) در طول الکتروفورز می‌شود و این امر امکان جداسازی پروتئین‌ها بر اساس اندازه را فراهم می‌کند. به‌طور کلی، هرچه اندازه پروتئین بزرگ‌تر باشد، حرکت آن در ژل کندتر است. ژل‌های آکریل‌آمید را می‌توان با غلظت‌های مختلف تهیه کرد. به‌طور کلی، پروتئین‌های با وزن مولکولی پایین در ژل‌های با درصد بالا بهتر تفکیک می‌شوند، در حالی که پروتئین‌های بزرگ‌تر به ژل‌هایی با درصد پایین‌تر برای جداسازی مناسب نیاز دارند.
با استفاده از دستگاه‌های خودکار Simple Western™، تمام مراحل پس از آماده‌سازی نمونه و بارگذاری پلیت به‌صورت خودکار انجام می‌شوند. Simple Western از الکتروفورز موئینه برای جداسازی نمونه‌ها استفاده می‌کند و سپس نمونه‌ها به‌طور کووالانسی به دیواره موئینه متصل می‌شوند. مراحل اتصال آنتی‌بادی و آشکارسازی به‌طور دقیق درون یک دستگاه رومیزی خودکار کنترل می‌شوند و نتایجی کاملاً کمی، تکرارپذیر، با امکان آشکارسازی چندگانه و نرمال‌سازی بر اساس پروتئین کل ارائه می‌دهد.
پروتکل الکتروفورز ژل SDS-PAGE
1. ژل مناسب با درصد پلی‌آکریل‌آمید متناسب با وزن مولکولی پروتئین مورد نظر را تهیه یا خریداری کنید.
| اندازه پروتئین | درصد ژل |
|---|---|
| 4-40 kDa | Up to 20% |
| 12-45 kDa | 15% |
| 10-70 kDa | 12.5% |
| 15-100 kDa | 10% |
| 50-200 kDa | 8% |
| >200 kDa | 4-6% |
پروتکل الکتروفورز ژل SDS-PAGE ژل آماده با درصد مناسب پلی‌آکریل‌آمید را تهیه یا خریداری کنید تا بر اساس وزن مولکولی، بهترین تفکیک پروتئین مورد نظر حاصل شود.
2. نمونه‌هایی که حاوی مقادیر برابر پروتئین هستند (10–50 میکروگرم پروتئین از لیزات سلولی یا 10–100 نانوگرم پروتئین خالص‌شده) و در بافر نمونه آماده شده‌اند را در چاهک‌های ژل SDS-PAGE بارگذاری کنید. یک نشانگر وزن مولکولی را در یکی از چاهک‌ها قرار دهید.
3. دستگاه الکتروفورز را طبق دستور سازنده با بافر اجرای 1X پر کنید.
| بافر | اجزا |
|---|---|
| 1X Running buffer | 25 mM Tris base 192 mM glycine 0.1% SDS Adjust pH to 8.3 |
4. ژل را طبق توصیه سازنده اجرا کنید.
توجه: ۱ تا ۲ ساعت در ۱۰۰ ولت استاندارد است، اما زمان و ولتاژ ممکن است نیاز به بهینه‌سازی داشته باشند.